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Titre
Impact FGFR3 sur la prolifération chondrocytaire SBS
Date
10 avr. 2026
Statut
Planifiée
Contexte & motivation
Les souris Fgfr3G380R montrent un retard de croissance crânio-facial. On cherche à quantifier l'effet spécifique sur la SBS (synchondrose sphéno-basilaire) avant 3 semaines pour comprendre la fenêtre critique.
Planification
Objectif principal
Comparer le taux de prolifération chondrocytaire (EdU+) dans la SBS entre souris WT et Fgfr3G380R à P7, P14 et P21.
Hypothèses
H1 — Hypothèse principale
Si FGFR3 est activé de manière constitutive, alors la prolifération chondrocytaire dans la SBS est réduite dès P7, car FGFR3 active la voie STAT1 qui inhibe la progression G1→S.
H0 — Hypothèse nulle
La mutation FGFR3G380R n'affecte pas la prolifération chondrocytaire dans la SBS aux stades précoces.
Variables indépendantes
Génotype (WT vs Fgfr3G380R) et stade (P7, P14, P21).
Variables dépendantes
% cellules EdU+ dans la zone proliférative de la SBS (comptage par champ, immunofluorescence).
Variables contrôlées / confondantes
Sexe (utiliser uniquement des mâles), heure d'injection EdU (2h avant sacrifice), même opérateur pour les coupes.
Protocole
1. Injection EdU IP (50 mg/kg) 2h avant sacrifice. 2. Dissection tête + fixation PFA 4% 24h. 3. Décalcification EDTA 15% 2 semaines. 4. Coupes coronales 10µm (cryostat). 5. Click-iT EdU revelation. 6. Coloration DAPI. 7. Imagerie confocale 20x. 8. Comptage automatisé ImageJ (plugin Cell Counter).
Points de vigilance
Décalcification incomplète = artefacts de coupe. Vérifier que la SBS est dans le plan de coupe avant de commencer le comptage. N minimum = 4 par groupe.
Actions suivantes
Si effet confirmé à P7 : ajouter expérience RNAscope FGFR3/STAT1 sur coupes adjacentes.
Liens & références
Passos-Bueno 2008 (FGFR3 signaling review) ; protocole EdU maison : /protocols/edu_proliferation.md
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